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克氏原螯虾虾青蛋白A2基因克隆、组织分布及原核表达
作者 :  陈浩; 吉宏武; 张迪; 刘书成; 宋文奎; 郝记明
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虾青蛋白对甲壳类水产品色泽的形成和调控具有重要作用。为探究克氏原螯虾虾青蛋白A2(PcCRA2)的基因结构及原核表达,作者通过基因克隆获得PcCRA2基因编码序列(cra2),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测cra2基因在克氏原螯虾9种组织中的表达模式,并以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主,进行PcCRA2异源重组表达。结果表明,克氏原螯虾cra2基因cDNA全长573 bp,编码190个氨基酸。生物信息学分析显示,虾青蛋白A2相对分子质量为21 158.9,理论等电点为5.59。氨基酸序列比对发现,克氏原螯虾cra2编码蛋白质序列与红螯螯虾相似度最高,为91.58%。RT-qPCR结果显示,cra2在所检组织中均有表达,在表皮的表达量最高(P<0.05)。构建了pET28a-cra2原核表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达。其最佳诱导表达条件为:接种4 h后加入0.5 mmol/L IPTG于30℃诱导6 h;UV-vis结果表明重组蛋白质能与虾青素特异性结合,最大吸收峰为505 nm。该研究结果为进一步研究虾青蛋白质的生物功能奠定基础。

关 键 词 :  虾青蛋白; 克氏原螯虾; 实时荧光定量PCR; 原核表达
论文来源 :  食品与生物技术学报.2024,(2)
语种 :  中简
所属领域 :  >>> 海洋渔业
>>> 海洋科学研究
>>> 海洋科学研究 >>> 海洋基础科学研究 >>> 海洋自然科学研究
入库时间 :  2024-04-08
浏览次数 :  1